[已解决]如何消除自发荧光

大兵

请问有没有做荧光显微成像的朋友，最近遇到一个问题，用蓝光激发会产生自发荧光，有什么办法能够消除自发荧光吗或者检测自发荧光来源于系统中的哪个镜片或者哪种材料?

最佳答案

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Maxray

2024-10-11 17:24

要先去确认你的自发荧光主要来自哪里，是观察样本还是物镜本身，可以通过有无观察样本的荧光对比实验分析
如果是来自观察样本，可以去试试共聚焦成像或者多光子荧光显微
如果是来自物镜本身，物镜自身的自发荧光90%都是因为材料，还有一部分是因为镜片结构。高折射率材料有更高的自发荧光系数，高NA的镜头中的高折射率材料最多，可以去定制镜头全采用低自发荧光材料，会改善很多。

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SZUGDS231

最暴力的方式就是增加一个二向色镜或者滤光片，如果要检测就需要知道每一枚镜片上的膜系，逐枚分析

9359

样本是生物组织？生物组织的自发荧光很多，这也是为什么近红外生物成像有优势的原因。

Maxray

要先去确认你的自发荧光主要来自哪里，是观察样本还是物镜本身，可以通过有无观察样本的荧光对比实验分析
如果是来自观察样本，可以去试试共聚焦成像或者多光子荧光显微
如果是来自物镜本身，物镜自身的自发荧光90%都是因为材料，还有一部分是因为镜片结构。高折射率材料有更高的自发荧光系数，高NA的镜头中的高折射率材料最多，可以去定制镜头全采用低自发荧光材料，会改善很多。

大兵

Maxray 发表于 2024-10-11 17:24
要先去确认你的自发荧光主要来自哪里，是观察样本还是物镜本身，可以通过有无观察样本的荧光对比实验分析
...

感谢大佬解答，已经做过样本有无的对比实验，确认自发荧光来源于光学系统。这里请教两个问题：
1.因为系统中还有二向色镜、反射镜和筒镜等，这些元件有没有可能产生荧光呢?
2.我们可以通过测试知道物镜的材料吗还是只能向物镜供应商咨询物镜的材料(大概率不会告诉)?

大兵

9359 发表于 2024-10-11 13:39
样本是生物组织？生物组织的自发荧光很多，这也是为什么近红外生物成像有优势的原因。 ...

是的，不过去掉样本也会产生自发荧光。

大兵

SZUGDS231 发表于 2024-10-11 10:22
最暴力的方式就是增加一个二向色镜或者滤光片，如果要检测就需要知道每一枚镜片上的膜系，逐枚分析 ...

感谢大佬回复，请教下镜片的镀膜也会产生自发荧光吗?

SZUGDS231

大兵 发表于 2024-10-12 09:30
感谢大佬回复，请教下镜片的镀膜也会产生自发荧光吗?

一般是不会产生自发荧光的，镀膜的目的是增透减反

SZUGDS231

大兵 发表于 2024-10-12 09:30
感谢大佬回复，请教下镜片的镀膜也会产生自发荧光吗?

镜片膜层一般不会产生自发荧光，镀膜的作用仅是增加透过率，减少反射

9359

大兵 发表于 2024-10-12 09:27
是的，不过去掉样本也会产生自发荧光。

你的自发荧光分布如何？会不会可能是没滤掉的激光？